En la obra de Shakesper, "Macbeth", Macduff decide huir a Inglaterra en respuesta al asesinato de Duncan por Macbeth para ir en apoyo de Malcolm, el hijo y heredero de Duncan. Sin embargo, al huir a Inglaterra, Macduff condena a su propia familia, quien es asesinada por Macbeth en respuesta. Al huir a Inglaterra, Macduff también intenta persuadir a Malcolm para que reclame el trono escocés con una demostración de fuerza.
En la obra, el primer diálogo de Macduff implica el descubrimiento del cadáver del rey Duncan dentro del castillo de Macbeth. Su decisión de huir a Inglaterra se debe a su sospecha de que Macbeth fue, de hecho, el asesino de Duncan. Mientras se encuentra en Inglaterra y trata de persuadir a Malcolm para que actúe, Macduff es informado de la muerte de su familia y la consecuencia de su acción por parte de otro escocés llamado Ross.
Macduff finalmente regresa a Escocia junto a Malcolm y sus aliados ingleses y se encuentra con Macbeth en una batalla en el Castillo Dunsinane. Macduff finalmente mata a Macbeth, aunque en el juego esto ocurre fuera del escenario. Luego le presenta su cabeza a Malcolm y lo declara el legítimo rey de Escocia.
Antes del asesinato del rey Duncan por Macbeth, Macduff tenía el título de Thane of Fife. Las primeras referencias a Macduff se encuentran en una obra del siglo XIV llamada "Chronica Gentis Scotorum".
