Uno de los factores que afecta la actividad de la enzima es el pH. Si hay pequeños cambios en el pH, la enzima se desnaturalizará y se perderá la actividad catalítica.
Otro factor es la temperatura. Las reacciones catalizadas por enzimas aumentarán la velocidad a medida que aumenta la temperatura. Debido a que las enzimas son proteínas, se desnaturalizarán y se volverán inactivas a temperaturas más altas.
La concentración de la enzima también afecta la actividad. Si la concentración de la enzima aumenta mientras la concentración del sustrato se mantiene constante, la velocidad de la reacción se duplicará a medida que se duplica la concentración de la enzima. Esto se debe al hecho de que la concentración molar de la enzima que se está utilizando casi siempre será más baja que la concentración molar del sustrato.