Los iroqueses creían en múltiples deidades, siendo el más importante el creador de seres humanos, plantas, animales y el bien en el mundo, conocido como Gran Espíritu. Aunque no creían que los humanos pudieran comulgar directamente con estos espíritus, creían que era posible quemar tabaco.
Los iroqueses sintieron una gran reverencia por sus sueños, e interpretaron y buscaron señales en ellos. No tenían sacerdotes ni chamanes a tiempo completo, sino que en su lugar designaron a especialistas masculinos y femeninos a tiempo parcial para realizar ceremonias religiosas.
Los iroqueses elaboraron "Máscaras faciales falsas", que eran rostros tallados en árboles en pie y luego se cortaban, decoraban y usaban después. Estas máscaras representan a los espíritus que aparecieron al tallador en la ceremonia del tabaco realizada de antemano.
Los hombres de la tribu cazaban y pescaban, construían casas, despejaban campos para plantar, comerciaban con forasteros y participaban en cualquier guerra. Las mujeres cultivaban, criaban niños, preparaban comidas y hacían canastas y otros utensilios.
Muchas partes de la cultura iroquesa involucraron aspectos matrilineales. Aunque las personas casadas y divorciadas y los hombres a menudo tenían múltiples esposas, después del divorcio, los hijos permanecían con la madre. La herencia también siguió este patrón, con la propiedad de las mujeres.
Los iroqueses no practicaron ningún rito de paso formalizado conocido, excepto para aquellos que tomaron una posición política.
