Los ingredientes principales en la tinta del resaltador son agua y glicol solvente. Alrededor del 5 por ciento de la tinta es pigmento o tinte fluorescente. Algunos resaltadores también contienen una pequeña cantidad de biocida para prevenir el crecimiento de hongos y bacterias.
Los tintes utilizados en los marcadores de resaltado amarillos están basados en pireno. Los resaltadores azules contienen colorante de trifenilmetano. El colorante de trifenilmetano combinado con piranina produce tinta verde para resaltar. Los resaltadores rosas contienen rodamina. Los resaltadores púrpura se hacen con rodamina mezclada con trifenilmetano. La xantina combinada con cumarina produce una tinta de color púrpura.
Las moléculas químicas en la tinta del resaltador absorben la luz ultravioleta. Esto "excita" los electrones dentro de las moléculas, que luego liberan una forma de onda de la luz ligeramente más larga. Esta interacción de la luz y los productos químicos se interpreta por el ojo como fluorescencia.