La tinta de la India, el rojo Congo y la eosina pueden usarse como tintes alternativos en lugar de la nigrosina para la tinción negativa. la tinta de la India funciona bien, pero sus pequeñas partículas causan el movimiento browniano, lo que hace que la identificación de las bacterias un poco dificil.
Las manchas negativas no tiñen las células bacterianas, que están cargadas negativamente, sino el fondo alrededor de las células. Bajo el microscopio, las células aparecen como contornos incoloros sobre un fondo oscuro. Este método de tinción se utiliza para estudiar muestras que no deben fijarse con alcohol o calor, para que la visualización de una célula viva sea posible.
Algunas bacterias tienen estructuras extracelulares llamadas cápsulas, que se destruyen fácilmente con el lavado y el calentamiento. Para identificar si las bacterias de la muestra tienen cápsulas, se emplea una técnica suave que usa tinción negativa.
